ATCC细胞株培养操作

　　ATCC细胞株培养操作：

　　将冻存的ATCC细胞株从有干冰的包装中取出，理解复苏培养，或迅速转移放置在液氧罐气相层在——130°C以下的度存储。

　　1、先准备好细胞培养皿或细胞株培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37°c水浴中预先温热细胞培养基

　　2、小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖一下的部分置于37°C水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待zui后一块小冰晶体刚融化，就应该将细胞冻存管取出水浴。

　　3、在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用于菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。

　　4、小心拧干冻存管的顶部，将管内容物用1MI移枪转移到9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟（125*g）.小心吸去上清液以去除抗冻剂（二甲基亚砜），避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的*培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5——8mI培养基并转移到T125培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12——20mI培养基并转移到T75培养瓶。

　　5、将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37°C二氧化碳浓度5%的培养条件下进行卵育。细胞培养24小时候后应在显微镜下观察细胞株形态和生长状况 。

　　ATCC细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲，可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。

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