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ATCC细胞冷冻保存方法

原载自:www.co-bioer.com[技术资料频道]  2018-02-24  浏览次数:2188

   ATCC细胞通常保存在冻存管中用干冰运输,或是在培养瓶中常温运输。但对于中国客户,由于运输时间稍长,都是采用干冰运输的方式。
  在收到冻存细胞后,很重要的一点是迅速解冻使其立即复苏并除去DMSO,然后将它们放置到培养基中。如果做不到上面这点,需将细胞存储在液氮中(-130℃以下)。不要将冻存细胞储存在高于-130℃的温度下,这会使细胞存活率迅速下降。
  ATCC细胞注意事项:
  (1)欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态,约为80–90%致密度。
  (2)冷冻前检测细胞是否仍保有其*性质,例如hybridoma应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
  (3)注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级,无菌且无色(以0.22micron FGLP flon过滤或是直接购买无菌产品,如Sigma D-2650),以5~10ml小体积分装,4℃避光保存,勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级,以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用,因长期储存后对细胞会有毒性。
  ATCC细胞冷冻保存方法:
  (1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟→ -20℃30分钟→ -80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  (2)程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

 

 

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