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技术文章 / article
【产品推介】MSI标准品
原载自:www.co-bioer.com[技术资料频道] 2021-04-01 浏览次数:1770
微卫星不稳定性(Microsatellite Instability,MSI),是指由于在DNA复制时插入或缺失突变引起的微卫星(Microsatellite,MS)序列长度改变的现象,常由错配修复功能(Mismatch repair,MMR)缺陷引起。MS序列,是一些短而重复的DNA序列,一般由1~6个核苷酸组成,串联重复排列,常见类型为双碱基CA/GA/GT或单碱基A/T等。MS序列可以位于基因的重要非编码区,也可以位于基因的编码区,多态性分布于整个基因组,个体差异大。MSI现象于1993年被Jacobs等人在结直肠癌中*发现,与癌症发生有关,可以用于癌症检测。
MSI检测方法
MSI常由MMR基因突变及功能缺失导致。因此,在检测癌细胞中的MSI时,既可以通过检测MMR基因缺失来确定是否发生MSI,如依赖于免疫组化技术的蛋白水平检测,也可以直接检测MSI的序列变化,如PCR(聚合酶链反应)检测等的分子水平检测。
(一)免疫组化方法
免疫组化方法(Immunohistochemistry, IHC):采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中错配修复基因MLH1、MSH2、MSH6及PMS2的表达。任何一项错配修复基因表达缺失,被定义为MSI,否则即为微卫星稳定(MSS)。其中一个表达缺失则称为低度微卫星不稳定(MSI-L),2种或2种以上蛋白表达缺失为高度微卫星不稳定(MSI-H)。
(二)分子水平的检测
1.聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术
目前主要采用多重荧光PCR结合毛细管电泳的方法。通过PCR方法检测特异的微卫星重复序列扩增判定MSI状态,比较肿瘤患者的标本组织与正常组织的位点突变情况。其比较的位点为美国国家癌症研究所(NCI)推荐的5个微卫星位点:BAT25、BAT26、D5S346、D2S123及D17S250。其中≥2个位点发生改变判定为高度微卫星不稳定(MSI-H),仅1个位点发生改变判定为低度微卫星不稳定(MSI-L),无位点改变判定为微卫星稳定(MSS)。有研究认为,二核苷酸重复序列的特异性和灵敏度比单核苷酸重复序列要低,因此关于MSI检测的位点仍存在争议。Bacher等对266个微卫星位点(其中包括单核苷酸、二核苷酸、四核苷酸以及五核苷酸微卫星位点)检测的敏感性及准确性进行评估,提出了Promega分析系统,该系统使用五个单核苷酸微卫星位点(BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24和MONO-27)及两个五核苷酸微卫星位点(Penta C和Penta D)检测MSI。大量的实验证实,MMR免疫组化检测结果与MS的PCR检测结果有高度关联性,灵敏度92%,特异性可达100%。
2.新一代测序方法(Next Generation Sequencing, NGS)
NGS又称为第二代测序技术,是一种高通量测序技术,能一次性对几十万到几百万条基因分子进行序列测定。目前NGS方法已经成为检测MSI的新工具,其优势是可以实现多位点高通量检测。纪念斯隆·凯特琳癌症研究中心(Memorial Sloan Kettering Cancer Center,MSK)的一项研究使用NGS方法对12,288例实体瘤病人进行检测,判定MSI状态,并用MSI-PCR/MMR-IHC进行了验证。实验证明, NGS方法较MSI-PCR方法具有更高的敏感性。
科佰生物可以提供MSI的诊断标准品,保证诊断方法的检测限、灵敏度、稳定性。
MSS-P1(1.92%) Reference Standard CBP80002-1
MSS-P2 Reference Standard CBP80002-2
MSS-P3 Reference Standard CBP80002-3
MSS-P4(1.92%) Reference Standard CBP80002-4
MSI-H-U1(100%) Reference Standard CBP80002-5
MSI-H-U2(98.08%) Reference Standard CBP80002-6
MSI-H-U3 Reference Standard CBP80002-7
MSI-H-U4(90.38% Reference Standard
CBP80002-8
MSI-H-U5(94.23%) Reference Standard CBP80002-9
MSI-H-U6 Reference Standard CBP80002-10
MSI-H-U7 Reference Standard CBP80002-11
MSI-H-U8 Reference Standard CBP80002-12