细胞株的核型分析实验操作流程分析

　　细胞株的核型分析实验操作研究：

　　进行该实验的所需材料有：姬姆色素染料；秋水仙素；甲醇；冰乙酸；KCL；0.25%胰酶。

　　实验仪器包括显微镜、二氧化碳培养箱、水浴锅、烘箱等。

　　具体实验步骤如下：

　　将传代的细胞密度调整为1*105/ml，接种于1个10cm培养皿，置于37℃，5%CO2培养箱中培养，约培养48小时后，加秋水仙素（终浓度为0.2ug/ml），摇匀后37℃孵育1-2h。

　　将培养的细胞用胰酶消化收集到10ml离心管中，1000转/分，离心10分钟，去除上清液，留500ul,先将底部细胞吹匀，加入8ml 37℃预温的0.075M KCL(37℃提前水浴)，打匀后放37℃水浴箱40min，加入新鲜配制的固定液（甲醇/冰乙酸=2/1-3/1）2ml地混匀，室温下放10min后，1000转/分离心10min，去上清液，留500ul,先将底部细胞吹匀，新加入8ml固定液，离心清洗、重复三次后、滴片，放入60℃烘箱老化6小时（过夜）；再将烤干的玻片放入胰酶（0.25%）中消化1min左右后，再放入吉姆萨染液中染色5-6min，取出用流水冲去染液后，在显微镜下观察结果。

　　相关实验注意事项：

　　1.滴片的载玻片需预先泡酸处理；

　　2.低渗溶液要用无菌水配制；

　　3.低渗溶液，胰酶需要提前预热；

　　4.固定液、胰酶、吉姆萨染色液需现配现用。

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