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你知道ATCC细胞如何解冻吗?

原载自:www.co-bioer.com[技术资料频道]  2022-03-02  浏览次数:860

   ATCC细胞培养时通过在支持物(如盖玻片)上培养贴壁细胞,可以应用抗体检测细胞表面抗原的表达或进行酶细胞化学以及免疫细胞化学检测。该方法的优点是细胞贴壁牢固,能够维持细胞生长时的状态。
  ATCC细胞的冷冻保存方法:
  传统方法是冷存管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16-18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  程序降温则利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞之保存。
  那么ATCC细胞又如何解冻呢?
  1.冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。
  2.细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常。
  3.材料:37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器。
  4.主要步骤:
  ①操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害;
  ②自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉;
  ③将新鲜培养基置于37℃水槽中回温,回温后喷以70%酒精并擦拭之,移入无菌操作台内;
  ④取出冷冻管,立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入无菌操作台内;
  ⑤取出解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10-1:15),混合均匀,放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试;
  ⑥解冻后是否立即去除冷冻保护剂(如DMSO),依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内,离心1000rpm,5分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入CO2培养箱培养;
  ⑦若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。

 

 

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