细胞株开发的主要过程要知道

　　细胞株开发是抗体药物CMC的起点和基础，细胞株的好坏直接决定生产成本、工艺复杂度和产品质量，开发稳定细胞株的过程包括：

　　宿主细胞的选择，表达载体的构建与转染，单克隆化以及高表达细胞株的筛选。目前大部分的抗体药物都是选用的CHO细胞，但原始CHO细胞系流转到不同的实验室和公司，经过不同的培养、驯化、改造和重新克隆后形成了不同种类的CHO细胞系。这些不同CHO细胞系之间的形态、生长、表达、代谢，甚至基因组都有较大差异。宿主细胞的选择除了考虑研发周期、成本以及后期整体的生产成本，还需要有清晰的历史背景信息。

　　表达载体的构建和转染开始是指将表达抗体的目的基因构建到载体上，再将该载体转染进入宿主细胞内。常用于哺乳动物细胞转染的方法有磷酸钙法、阳离子脂质体法、病毒转染法和电穿孔法。没有一种方法适用于所有的细胞和实验，需要根据细胞类型和实验进行选择。理想的方法应具有高转染效率、低细胞毒性和对正常生理学的影响小，并且易于使用和具有可重复性等特点，所以在正式开展转染实验前还要做多项预试验，优化转染条件。

　　筛选高表达单克隆细胞株是细胞株构建的关键步骤，衡量标准包括抗体表达量、产品的纯度、翻译后修饰、代谢稳定性等。常用的筛选克隆的方法包括：有限稀释法、流式细胞仪分选法、半固体培养基筛选法等。

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