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原载自：www.co-bioer.com[技术资料频道] 2025-12-16 浏览次数：12

　　细胞株一旦“落户”实验室，就会伴随整个项目周期。然而，一份传代30次后悄然变异的基因组，足以让千万投入瞬间归零。因此，在建株阶段就把“质量”与“稳定性”写进细胞DNA，是生物药、疫苗、基因治疗共同的“第一课”！

　　一、来源“验明正身”

　　无论来自组织原代或是商用库，均需三证合一：STR图谱、细胞种属鉴定报告、病原体“九项”阴性证明。建株前用ATCC数据库比对8个核心位点，匹配度≥80%方可入库；同步做支原体16S PCR和杆菌肽琼脂培养，双阴性才允许进入下游扩增，避免“隐形感染”在后续放大阶段爆发。

　　二、单克隆化“一夫一妻”

　　有限稀释法结合高通量成像，每孔确认仅一个细胞；96 h后拍照留档，确保单克隆源性。此步骤可把异质性压到低，为后续稳定性测试提供“干净”起点。经验显示，跳过单克隆的混合群，30代后基因组SNV增加3–5倍，产量下降20%以上。

　　三、两级库“时空双锁”

　　按GMP理念建立MCB与WCB，每支冻存管用10%DMSO、程序降温盒-1℃·min⁻¹降至-80℃，再转入液氮气相。MCB限传5代，WCB限传10代；任何实验只能动用WCB，确保原始“种子”永远封存。

　　四、基因组“快照”留底

　　建株完成即做全基因组测序，建立“基线指纹”；后续每10代复测，差异位点≤20个且不在关键调控区判为合格。若发现p53、Ras等驱动突变，即使生长更快也要整批淘汰，防止“高产但致癌”的隐患。

　　五、表型“双轴”验证

　　产量轴：连续3批14 d fed-batch，目标蛋白滴度CV＜10%；质量轴：N-糖谱、电荷异构体、SEC-HPLC单体比例与基线相比差异≤5%。两项同时达标，才算“稳定性”过关。

　　六、污染“雷达”长开

　　库检每半年做一次“14天杆菌肽+Hoechst”双法支原体抽检；新进胎牛血清先做7 d指示细胞培养，确认无CPE才允许用于扩增。把“0污染”从口号变成可量化数据。

　　七、数据“终身追溯”

　　从组织块到最终WCB的每一次传代、冻存、复苏、检测，全部录入LIMS系统，生成二维码烙印在冻存管。10年后若临床批件要求复盘，可30 min内调出完整链路。

　　细胞株的质量不是“测”出来的，而是“建”出来的。只有把身份鉴定、单克隆化、两级库、基因组快照、表型双轴、污染雷达、数据追溯七步固化成SOP，才能让细胞在60代后仍是当初那个“少年”，为后续工艺放大和临床申报节省至少6个月、降低30%失败成本。