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技术文章 / article
ATCC细胞系复苏要记住的细节及关键要点
原载自：www.co-bioer.com[技术资料频道] 2026-02-06 浏览次数：9
在生命科学研究中，ATCC提供的标准化细胞系是实验可重复性和数据可靠性的基石。然而，从液氮罐中取出一支冻存管到成功建立贴壁或悬浮生长的细胞群体，这一看似简单的“细胞复苏”过程，实则暗藏诸多技术细节。稍有疏忽，轻则导致细胞活力下降、增殖缓慢，重则造成污染或死亡。以下是进行ATCC细胞系复苏时必须牢记的细节与关键要点。
一、快速解冻是核心原则
ATCC细胞通常采用程序降温并保存于-196℃液氮中，其保护剂多为10%DMSO（二甲基亚砜）。DMSO在低温下对细胞毒性较低，但一旦温度回升至4℃以上，毒性迅速增强。因此，必须“快融慢冻”——复苏时应将冻存管立即放入37℃水浴中，轻轻摇晃，确保在1–2分钟内全融化。切忌在室温下自然解冻或用高温水加速，前者延长DMSO毒性作用时间，后者可能造成热休克。
二、稀释与离心操作需温和
解冻后，应迅速用75%酒精擦拭管壁，移入生物安全柜。将细胞悬液缓慢加入预热的培养基中（通常按1:5至1:10比例稀释），以降低DMSO浓度。此步骤需沿管壁缓缓滴加并轻柔混匀，避免剧烈吹打损伤脆弱的复苏细胞。随后，是否离心取决于细胞类型：贴壁细胞建议低速离心（120–200×g，5分钟）去除DMSO；而某些敏感悬浮细胞（如某些淋巴细胞系）则可直接接种，避免离心带来的机械应力。
三、使用正确的培养基与培养条件
ATCC为每株细胞提供详细的培养指南，包括基础培养基类型、血清浓度、是否添加L-谷氨酰胺、抗生素等。务必严格按照说明配制培养基，并提前预热至37℃。此外，注意细胞是否需要特殊气体环境或额外因子。一次传代前，建议保留部分原始冻存管作为备份，以防复苏失败。
四、防污染与无菌意识贯穿全程
整个复苏过程必须在超净工作台内进行，所有试剂、耗材均需无菌。操作者应穿戴实验服、口罩和手套，动作规范。特别注意冻存管外壁可能携带液氮污染物，解冻前务必消毒充分。若发现培养基浑浊、pH异常变黄或镜下有菌丝、运动颗粒，应立即废弃，避免交叉污染其他细胞。
五、复苏后观察与一次换液时机
细胞接种后，通常6–24小时内完成贴壁（贴壁细胞）或恢复悬浮状态。建议在复苏后6–8小时一次在显微镜下观察细胞形态与密度。一次换液时间很关键：过早可能冲走未贴牢的细胞；过晚则残留DMSO持续毒害。一般推荐在12–16小时后更换新鲜培养基。
ATCC细胞系虽经严格质控，但其“重生”仍高度依赖操作者的细致与规范。记住：快速解冻、温和处理、精准培养、严防污染——这十六字口诀，是确保珍贵细胞资源成功复苏、支撑后续实验顺利开展的根本保障。每一次成功的复苏，都是对科研严谨性的最好诠释。
