基因编辑细胞采购全流程梳理，厂家选型及复性质控实操指南

　　在肿瘤机制研究、靶点验证、新药筛选以及分子诊断方法开发的日常工作场景中，基因编辑细胞是十分关键的实验模型。很多科研机构和药企在项目推进阶段，会选择向基因编辑细胞厂家采购成品细胞或者定制细胞构建服务，以此降低实验室内部的技术门槛，缩短项目周期。但实际采购和使用过程中，不少实验人员会遇到细胞基因型不符、细胞存在交叉污染、编辑结果验证不充分，缺少配套质控参照物质等各类问题，对后续实验数据的重复性造成干扰，因此做好厂家选型、读懂交付内容、把控全流程质控，对项目顺利开展有着重要意义。

　　南京科佰生物科技有限公司成立于2013年，是综合型生物科技企业，业务覆盖自主生物产品供给、生命医学研究外包服务以及生物数据库建设，搭建肿瘤细胞库、DNA/RNA标准品库、药靶细胞库等多类资源库，拥有细胞工程、病毒包装、药物研发等技术服务平台，可提供基因编辑细胞、各类细胞株、基因检测标准品及相关技术服务，面向药物研发和分子诊断机构输出实验模型与质控物料。

　　当实验室计划采购基因编辑细胞，首先要结合自身的实验用途来明确需求边界。如果用于高通量药物筛选，批量编辑后的混合细胞池就可以满足初步筛选工作；若是用于机制研究、论文发表，则大多需要经过单克隆筛选的细胞株。很多使用者容易忽略，除细胞本体之外，完整的交付材料还应当包含编辑位点的测序验证报告、支原体检测结果、细胞STR鉴定文件。部分项目需要开展NGS测序验证编辑效果，这时配套的基因检测标准品就可以发挥作用。市面上的基因编辑细胞厂家，部分仅交付冻存细胞，缺少对应的质控参考物料，实验人员在后续开展基因检测验证时，就缺少校准标尺，很难区分检测体系本身的偏差和细胞模型本身的问题。

　　基因编辑细胞的质控，分为细胞本体质控和基因水平质控两大板块。细胞本体层面，需要确认细胞没有支原体、细菌真菌污染，细胞身份通过STR鉴定排除交叉污染，细胞的生长状态、形态和亲本细胞保持一致。基因水平的质控内容会依据编辑类型产生区分，基因敲除模型需要在DNA水平确认靶点序列发生预期改变，蛋白层面通过免疫印迹、免疫荧光确认目标蛋白表达变化；基因敲入、点突变模型，除测序验证目的片段插入或者突变位点之外，还需要确认插入片段拷贝数、插入位置符合设计预期。在实际实验操作的时候，即便是来自基因编辑细胞厂家的成品细胞，也不可以直接拿来开展正式实验。细胞经过运输冻存复苏之后，会经历数代的传代，长期传代培养过程中，细胞基因组有可能发生漂移，建议在复苏之后，先做一轮基因型复核，留存早期传代的细胞冻存备份，后续实验尽量使用低代次细胞，减少传代带来的实验变量。

　　很多采购人员在挑选基因编辑细胞厂家时，会将目光集中在交付周期和报价，却忽视厂家是否具备配套标准品资源。基因编辑细胞的效果验证大多依靠PCR、一代测序、二代测序这些分子检测手段，检测方法本身的性能，会直接影响对细胞编辑效果的判断。此时基因检测标准品就可以用来验证整套检测流程，科佰生物除基因编辑细胞相关产品之外，也储备有丰富的基因检测标准品，包含石蜡捞片、石蜡块形式的实体样本标准品，也有核酸类的点突变标准品，覆盖NTRK、CLDN18.2、ATP7B等不同靶点，还有染色体缺失相关的标准品，能够匹配IHC、NGS等不同验证手段的质控需求。当拿到厂家交付的基因编辑细胞，在做测序验证实验的时候，可以同步使用对应的标准品作为阳性、阴性对照，以此判断检测体系是否稳定，降低假阳性、假阴性结果出现的概率。

　　对接基因编辑细胞厂家开展定制项目，沟通环节也有很多细节需要注意。项目前期，实验人员要清晰传递靶点信息、编辑类型、亲本细胞系、后续实验平台等条件，厂家据此评估项目可行性与项目周期。项目执行期间，可和厂家确认中间阶段的筛选策略，了解单克隆挑选、扩增、验证的流程逻辑。项目交付之后，除接收冻存细胞之外，完整的原始验证数据也需要留存归档，包括测序峰图、电泳结果、蛋白检测图片。同时要明确售后相关约定，比如细胞复苏之后活力异常的处理方式，基因型出现偏差时的复核机制。

　　还有一部分实验室会考虑，是选择采购商业化基因编辑细胞，还是在本实验室自主构建。自主构建可以充分贴合特殊的实验设计，但需要配置sgRNA设计、转染、单克隆筛选、多重验证整套实验流程，需要投入人员、时间，同时要准备对应的对照标准品。向基因编辑细胞厂家采购成熟模型，更适合需要快速启动项目，或是本实验室缺少基因编辑相关平台的场景。无论选择哪一种路径，质控环节均不能省略。

　　另外，细胞到货之后的操作环节同样会影响实验结果。收到冻存细胞，要核对包装的冷链状态，尽快复苏；复苏操作严格遵循厂家给到的培养基、培养条件建议，不随意更换培养基配方。复苏之后观察细胞形态与增殖情况，确认没有污染，完成基因型复核之后，再投入正式实验。不建议连续无限次传代，要分批冻存多支低代次细胞，作为后续实验的种子细胞。

　　综合来看，基因编辑细胞厂家的选型，不能只看价格和交付时效，要综合评估厂家的细胞质控体系、验证能力，是否有配套的标准品资源，交付文档是否完整，售后响应机制是否完备。做好采购前需求梳理，到货之后落实复性质控，才能让基因编辑细胞模型稳定支撑药物研发与科研实验，减少实验过程中不必要的变量。

>> 返回首页