人结肠癌细胞株前期需要准备

　　人结肠癌细胞株的复苏,遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37.5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。在无菌台内将*培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。
　　人结肠癌细胞株前期需要准备：
　　1.构建好的外源基因载体
　　2.待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于48小时）以及细胞培养条件的说明
　　3.若需要检测靶基因的表达变化，请提供相应抗体
　　收到人结肠癌细胞株后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
　　（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
　　(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
　　1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
　　2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
　　3. 加入6-8ml*培养基，吸出，分到新的培养瓶中。一传二。
　　人结肠癌细胞株实验要点及说明：
　　1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
　　2．所使用的盖玻片应该为玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；
　　3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
　　4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
　　5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。