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北京细胞库中的细胞复苏试验是怎么做的?

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2020-02-17  浏览次数:1233

   北京细胞库所做的细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。
  1.试验准备:紫外线照台30min,准备好装有高压灭菌好的吸管、试管的饭盒、废液缸;培养基临用前放水浴箱里温育20分钟。在操作台上摆放好物品,左边为饭盒、培养液等,中间为酒精灯、试管架等,右边放滴管架、镊子,右上角放废液缸。
  2.灼烧培养瓶口及瓶盖,用滴管取培养基5ml加入试管中(一滴约为50ul)。
  3.戴手套,从-196℃液氮罐中取出冻存管,立即放入37℃水浴箱中快速解冻,同时不断轻轻摇动冻存管,保证冻存管内细胞1min内融化。以70%酒精擦拭保存管外部,移入无菌操作台内(慢冻快融)。
  4.用吸细胞液的滴管从冻存管中*吸出细胞悬液,加入到已装有培养基的试管中,塞子塞试管,800rpm离心2min,弃上清,试管底部的白色物质为细胞,轻弹混匀。往试管中加培养基、FBS(胎牛血清)各80滴和20滴(使FBS浓度为20%)。用吸细胞液的滴管轻轻吹打,使细胞混匀,以免在培养瓶里成团,影响细胞生长。
  5.将试管中的细胞悬液用吸细胞液的滴管全部吸出,加到培养瓶中,标记日期、细胞名称,再把培养瓶放入CO2培养箱。
  6.收拾所用物品、用75%酒精喷洒操作台,擦台,保持台面整洁。
  注意事项:
  1.入细胞室前观察CO2%压力,5-7.5mPa左右,减压器表压力不低于0.1mPa。
  2.刚复苏的细胞需要的营养成分更多些,让FBS浓度达到20%。
  3.离心时间为1-2min,速度为800转,不要离心太久,避免对细胞伤害较大。
  4.小心使用滴管,培养基和胎牛血清可以用一个滴管,但分开用更好。
  5.不是所有的细胞复苏后都能活。死亡原因有的是因为冻存时间太长(如2年以上),技术不过关(如吹打太激烈)、细胞传代数太多等。
  6.DMSO(二甲基亚砜)在常温下对细胞毒性较大,而在4℃时,其毒性大大减弱,故冻存的细胞复苏后应及时洗涤冷冻保护剂DMSO(离心后弃去上清),防止DMSO在常温下对细胞产生较大毒性!

 

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