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新闻动态 / news
北京细胞库中的细胞复苏试验是怎么做的？
原载自：www.co-bioer.com[行情动态] 2020-02-17 浏览次数：1183
北京细胞库所做的细胞复苏是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。
1.试验准备：紫外线照台30min，准备好装有高压灭菌好的吸管、试管的饭盒、废液缸；培养基临用前放水浴箱里温育20分钟。在操作台上摆放好物品，左边为饭盒、培养液等，中间为酒精灯、试管架等，右边放滴管架、镊子，右上角放废液缸。
2.灼烧培养瓶口及瓶盖，用滴管取培养基5ml加入试管中（一滴约为50ul）。
3.戴手套，从-196℃液氮罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴箱中快速解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，保证冻存管内细胞1min内融化。以70%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内（慢冻快融）。
4.用吸细胞液的滴管从冻存管中*吸出细胞悬液，加入到已装有培养基的试管中，塞子塞试管，800rpm离心2min，弃上清，试管底部的白色物质为细胞，轻弹混匀。往试管中加培养基、FBS（胎牛血清）各80滴和20滴（使FBS浓度为20％）。用吸细胞液的滴管轻轻吹打，使细胞混匀，以免在培养瓶里成团，影响细胞生长。
5.将试管中的细胞悬液用吸细胞液的滴管全部吸出，加到培养瓶中，标记日期、细胞名称，再把培养瓶放入CO2培养箱。
6.收拾所用物品、用75%酒精喷洒操作台，擦台，保持台面整洁。
注意事项：
1.入细胞室前观察CO2%压力，5-7.5mPa左右，减压器表压力不低于0.1mPa。
2.刚复苏的细胞需要的营养成分更多些，让FBS浓度达到20％。
3.离心时间为1-2min，速度为800转，不要离心太久，避免对细胞伤害较大。
4.小心使用滴管，培养基和胎牛血清可以用一个滴管，但分开用更好。
5.不是所有的细胞复苏后都能活。死亡原因有的是因为冻存时间太长（如2年以上），技术不过关（如吹打太激烈）、细胞传代数太多等。
6.DMSO（二甲基亚砜）在常温下对细胞毒性较大，而在4℃时，其毒性大大减弱，故冻存的细胞复苏后应及时洗涤冷冻保护剂DMSO（离心后弃去上清），防止DMSO在常温下对细胞产生较大毒性！
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