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淋巴母细胞株是如何构建成功的?

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2020-05-13  浏览次数:528

   细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell strain);如果可以连续传代,称为连续细胞株(continuous cell strain)。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。
  有关人类淋巴母细胞株的构建:
  1.4ml肝素抗凝血于离心管中,加入2ml RPMI 1640;
  2.混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min;
  3.1500rpm,15min,吸取白细胞层于另一离心管中;
  4.加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次;
  5.将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中,加入10μl环胞霉素和100μl的EB(EB病毒)液,混匀;
  6.水浴摇床,40次/分,37℃,3hr;
  7.1500rpm,15min。将细胞接种至1ml培养基中(内含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl环胞霉素,轻轻混匀,37℃培养;
  8.待5天后观察细胞转化和生长情况,决定是否半量换液。一般半量换液l—2次,并维持环胞霉素的浓度;
  9.待转化细胞数量明显上升,并出现细胞团块后,可转入25ml细胞培养瓶中,加1—2ml培养基,37℃培养10—15天,一般每隔3—4天观察一次,决定是否换液、传代;
  10.细胞生长达一定数量后冻存,冻存前应进行核型分析和存档。

 

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