ATCC细胞传代时如何挽救污染的细胞？

　　在细胞培养过程中，细胞污染是一个常见的问题，尤其是细菌、真菌和支原体污染。这些污染不仅会影响细胞的生长和实验结果的准确性，还可能导致细胞死亡。ATCC细胞在传代过程中，细胞污染仍然是一个需要特别关注的问题。

　　一、识别污染的早期迹象

　　在细胞传代前，识别污染的早期迹象至关重要。常见的污染迹象包括：

　　细菌污染：培养基变浑浊，细胞周围出现小颗粒，培养基pH值变化（通常变酸）。

　　真菌污染：培养基表面出现丝状或绒毛状物质，细胞形态异常。

　　支原体污染：细胞生长缓慢，培养基无明显变化，但细胞形态可能异常，如细胞聚集或变圆。

　　二、挽救污染细胞的步骤

　　1.确认污染类型

　　在采取任何挽救措施之前，首先需要确认污染的类型。可以使用显微镜观察细胞形态，或通过特定的检测方法（如PCR、荧光染色等）来确定污染的具体类型。这一步骤对于选择合适的挽救方法至关重要。

　　2.选择合适的抗生素或抗真菌剂

　　根据污染类型，选择合适的抗生素或抗真菌剂。例如：

　　细菌污染：可以使用广谱抗生素，如青霉素/链霉素或庆大霉素。

　　真菌污染：可以使用抗真菌剂，如两性霉素B或制霉菌素。

　　支原体污染：可以使用支原体专用抗生素，如泰乐菌素或四环素。

　　3.逐步处理污染

　　更换培养基：首先将受污染的培养基全移除，用无菌的PBS（磷酸盐缓冲液）轻轻冲洗细胞，去除表面的污染物。

　　添加抗生素或抗真菌剂：将含有适当浓度抗生素或抗真菌剂的新鲜培养基加入培养瓶中，轻轻摇晃培养瓶，使细胞均匀分布。

　　观察细胞反应：将处理后的细胞放入培养箱中，定期观察细胞的生长情况和污染的清除情况。通常需要连续处理3-5天，每天更换含有抗生素或抗真菌剂的培养基。

　　4.评估处理效果

　　在处理过程中，定期通过显微镜观察细胞的形态和生长情况。如果污染得到控制，细胞形态恢复正常，可以逐渐减少抗生素或抗真菌剂的浓度，直至全去除。如果污染未能得到有效控制，可能需要考虑丢弃受污染的细胞，重新开始培养。

　　三、预防污染的措施

　　1.无菌操作

　　在细胞传代过程中，严格遵守无菌操作规程是预防污染的关键。所有操作应在超净工作台内进行，使用无菌的培养基和试剂，避免交叉污染。

　　2.定期更换培养基

　　定期更换培养基可以减少细菌和真菌的滋生。根据细胞的生长情况，通常每2-3天更换一次培养基。

　　3.定期检测

　　定期对细胞进行污染检测，尤其是在传代和冻存前后。可使用商业化的支原体检测试剂盒或PCR方法检测支原体污染，使用显微镜观察细菌和真菌污染。

　　在ATCC细胞传代时，挽救污染的细胞需要及时识别污染类型，并选择合适的抗生素或抗真菌剂进行处理。通过逐步更换培养基和观察细胞反应，可以有效控制污染，恢复细胞的正常生长。同时，严格遵守无菌操作规程和定期检测是预防细胞污染的重要措施。在细胞培养过程中，及时发现和处理污染问题，可以很大程度地减少对实验结果的影响，确保细胞培养的成功和实验数据的可靠性。

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