人结肠癌细胞株如何抑制生产

　　体外培养人结肠癌细胞株SW 620和 LOVO ,加入终浓度分别为 20 ～100μmol/L 的人参皂苷 Rh2。采用 MTT法测定药物对细胞的的增殖抑制率 ( IR ) ,并计算半数抑制浓度 ( IC50) 。倒置显微镜观察细胞形态。结果:人参皂苷 Rh2作用 SW 620和 LOVO  24 小时 IC50分别为 36μmol/ l和 40μmol/L;

　　人结肠癌细胞株实验方法

　　1.3.  1　细胞增殖抑制实验 　收集对数生长期的SW 620和 LOVO 细胞 , 以 1  ×105 /L 密度接种于 96孔培养板中,每孔 100μl,待细胞贴壁后加入终浓度为 20、30、40、50、60、70、80、100 mol的 Rh2,每个浓度设平行孔 4个 ,于37℃, 5% CO培养箱中继续培养 24、48和72小时,每孔加入  5mg/mL的MTT20  L ,继续培养 4 小时后 , 离心弃上清 ,加入150 L DM SO溶解 ,酶标仪 490nm 处检测 OD 值 ,计算药物的体外生长抑制率 ( IR )  IR  =  ( 1 - 给药孔平均值 /对照孔平均值) 所对应的药物浓度 (IC50  ) 。×100% ,计算 50%抑制率时所对应的药物浓度 (IC50  ) 。

　　1. 3. 2　人结肠癌细胞株细胞形态学观察　上述细胞在加入 MTT之前 ,倒置显微镜照相 ,记录细胞形态学变化。

　　1. 4　统计学方法 　采用 SPSS13.  0 进行统计学分析 ,所有数据用  x ±s  表示,采用 t检验

　　2  人结肠癌细胞株结果

　　2.  1　人参皂苷 Rh2 对人结肠癌细胞株SW 620 和LOVO 生长的抑制作用　不同浓度 Rh2作用于细胞后不同时间,细胞毒作用呈明显的时间和剂量依赖性, 见图 1 ～5。Rh2 对SW 620细胞的IC50为36μmol/L ,而对 LOVO细胞的IC50为40μmol/L作用时间均为 24小时。

　　2. 2　细胞形态观察　加药组细胞体积变小、变形出现皱缩、变圆、脱落现象,细胞核固缩凝块,见图 6～7。

　　显微镜观察人结肠癌细胞株 ,药物作用后细胞出现明显的凋亡形态。结论:人参皂苷 Rh2对 SW 620和 LOVO 细胞的生长具有抑制作用 ,且呈时间剂量依赖性。

　　肠癌是人类高发的消化系统恶性疾病 ,在恶性肿瘤发病率中排第 4 位 ,转移和复发是大肠癌患者死亡的主要原因之一。目前临床以手术治疗并辅以术后放、化疗为主要治疗手段 ,但对晚期肠癌效果并不显著。人参皂苷是从中药人参中提取的具有抗癌作用的主要活性成分 , 以往的人结肠癌细胞株研究表明其能诱导细胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用。国内外文献先后报道人参皂苷 Rh2 对多种肿瘤细胞如人肝癌细胞SK2HEP21、乳腺癌细胞及白血病细胞 HL60等具有抑制增殖和诱导凋亡作用。本实验旨在研究人参皂苷 Rh2 对人人结肠癌细胞株增殖的抑制作用。

　　人参皂苷 Rh2 作为抗肿瘤作用非常显著的中药单体 ,可以通过降低细胞内 Ca2+浓度抑制 PKC α的转位和激活 , 进一步抑制细胞 内PKCα蛋白的表达 ,zui终阻碍 PKCα介导的增殖信号传导过程      ,抑制肿瘤细胞增殖 , 同时抑制端粒酶活性 ,使肿瘤细胞的端粒长度不能维持而进入衰老并zui终死亡[2 ]  。Rh2可通过线粒体途径诱导细胞凋亡[ 3 ] ,且其作用后使 DNA 含量较多的 S期细胞数量减少 , 而 DNA 含量较少的 G1 期细胞数量增多[4 ] ,进一步发挥阻滞细胞周期的作用。同时 Rh2是特异性抑制 Pgp 功能的逆转剂[ 5 ],一定程度提高肿瘤对多种化疗药物的敏感性 ,减少化疗药物的临床用药剂量和毒副作用[ 6, 7 ]  。我们研究发现 ,人参皂苷 Rh2单体对人结肠癌细胞株株 SW 062 和 LOVO 的生长有抑制作用 ,且与时间和浓度呈依赖性。同时, 还发现 Rh2有体外诱导细胞凋亡的作用 ,显微镜下观察细胞出现浓缩、变圆、脱落等细胞凋亡形态学改变。本研究结果表明,人参皂苷 Rh2单体有抑制人结肠癌细胞株增殖和诱导其凋亡的作用 ,有潜在治疗结肠癌的应用价值 ,但其具体机制尚有待于进一步研究。

上一篇 : 科佰金秋校园行，走进南京医科大学    下一篇 :  中国上海细胞库如何保证试剂不受污染和不变质

>> 返回首页