ATCC细胞接收操作

　　ATCC细胞接收操作：

　　1．由于细胞运输途中存在较多不可控因素（如温度变化，强烈振荡，时间较长，生长条件不适宜），可能出现漏液，污染，细胞漂浮及死亡等状况，因此请务必在收到细胞当天提供原始细胞图片。

　　图片拍摄步骤：收到细胞快递当日必须先着重对培养基拍*组照片，观察是否有漏液和培养基是否颜色变浑浊，是否变异常，并显微镜下拍细胞100X，200X各两张，拍摄照片应清晰；第二组照片，未开瓶盖、未做任何处理把细胞培养瓶静置在培养箱2--4h后进行拍摄；第三组照片，细胞*次传代后，如果细胞有问题，要每天都有照片记录下来提供给甲方。

　　根据提供的图片，本公司技术人员分析细胞确有问题，承诺免费提供一次；若未在规定时间限制内提供相关图片，默认收到细胞时细胞正常。

　　2.由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基，培养3天，3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请提供细胞图片跟进解决。（这里是针对原来*培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度）

　　3.收到细胞时若无以上两种异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，若为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中的培养液吸出，留5ml左右培养基（T25细胞培养瓶）继续培养；超过80%汇合度时，请按照细胞培养条件进行传代培养。

　　4.收到细胞，原瓶中的培养液若颜色正常，可以收集继续使用，在*次消化传瓶时，建议留一瓶细胞继续使用我们的培养液，其他瓶的细胞可使用客户自己的培养液进行培养，这样可以减少由于细胞不适应培养液导致的问题，请按照细胞处理方法进行操作。

　　ATCC细胞株配制注意事项

　　1.细胞株经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。

　　2.ATCC细胞株一般不需要调pH。对于要调节pH的细胞株，一般用pH试纸测定其pH。如果细胞株偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏细胞株成分。

　　3.细胞株在使用时也可以做成不含琼脂的液体细胞株，用于菌类的震荡培养。

　　4.ATCC细胞株也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L细胞株，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。

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