ATCC细胞的复苏事项可要看好了！

　　ATCC细胞复苏的原则：

　　在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。

　　ATCC细胞的复苏事项：

　　1.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例，配置相应的*培养基，确保细胞培养条件与说明书一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，应自行承担。每株细胞2支冻存管复苏时建议先只复苏一支，若复苏出现问题请及时与厂家取得联系。

　　2.取出冻存管，浸入37温水浴中，并不时摇动令其尽快融化，注意管口不要没入水面以下，以免造成污染。

　　3.从37水浴中取出冻存管，用75%酒精擦拭冻存管表面，放入超净台内。吸出细胞悬液，转移至培养瓶内，补加6-8mL培养液，37温箱静置培养，隔天换新鲜培养液，以去除DMSO，或者复苏当时离心去除DMSO，并在显微镜下观察细胞状态和密度；对于贴壁展开较慢的细胞，建议复苏当时去除DMSO，待细胞贴壁展开后再换液（原代细胞：细胞悬液离心后观察管底沉淀初步判断细胞量，后行台盼蓝染色以确定细胞存活率；接种后隔天观察细胞贴壁量，以判定细胞贴壁率）。

　　4.贴壁细胞

　　过夜培养后多数细胞会重新贴壁，待汇合度80%左右时正常传代。若细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。如台盼蓝染色证实细胞活力正常则1000rpm离心3-5min收集细胞，用新鲜培养基重悬后移回培养瓶内重新贴壁培养。

　　5.悬浮细胞

　　过夜培养后多数细胞会逐渐恢复活力，有光泽、饱满。若细胞光泽暗淡，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。

　　6.建议在收到细胞后每天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于菌种的查询。

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