细胞株入门知识讲解

　　原代细胞

　　用酶或机械方法直接从人或动物组织中分离出来的细胞。严格来说，从机体分离出来到传代之前的细胞称为原代细胞，绝大部分的原代细胞在体外可以分裂10-15次(这与细胞的端粒长短有关)，再加上取材，成本等因素，通常会把培养的第一代到第十代以内的细胞统称为原代细胞。

　　细胞系

　　原代细胞一般传至10代左右，大部分细胞衰老死亡，但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，存活的细胞一般能够传到40-50代，叫细胞株。当50代以后又会出现“危机”，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点，从而可能无限制地传代下去，称为细胞系。

　　也有认为细胞系（cell line）指原代细胞培养物经传代成功后所繁殖的细胞群体。也指可长期连续传代的培养细胞。由此便引申出了后来的有限细胞系（Finite Cell Line）、无限细胞系（Infinite Cell Line），因此，细胞系狭义的是指可连续传代的细胞，广义是指可传代的细胞。而细胞株是通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的单一细胞称为细胞株（Cell Strain）。

　　细胞系具有容易培养、种类多、价格便宜、无限传代等优点，也非常容易在培养、冻存中发生错误鉴定及交叉污染的问题。

　　动物细胞是生产治疗性重组蛋白的强有力工具。为与小分子药物区别开来，治疗性蛋白、疫苗以及细胞治疗产品统称为生物制品。宿主细胞的选择和改造对于提高产品的产量和质量来说至关重要。因此必须对细胞进行筛选，选出具有高表达量和良好生长特性的细胞。在此我们主要讨论适用于大规模生产重组蛋白的细胞株的筛选。

　　工业上重组蛋白的制备主要有两种方式：瞬时转染和稳定转染。瞬时转染经常用于制备少量蛋白（多达克级）用于药物开发早期的蛋白活性或动物实验。瞬时转染并不产生克隆细胞株，它只是暂时将编码外源蛋白的质粒转导入已有的细胞株里面（比如HEK293或COS细胞）。随着细胞的分裂外源基因不断丢失，蛋白产量较低，一般在1-100mg/L。近年来有报道称HEK293细胞中瞬时表达产量可达1g/L。

　　与瞬时转染不同，稳定细胞株是为工业化生产治疗性蛋白而构建的。稳定细胞株需要具备在不同的时间，不同的场地以及不同的批次间生产相同质量产品的能力。在选定生产用细胞株之后，需要建立主细胞库（mater cell bank）。从主细胞库复苏后，扩增建立工作细胞库（working cell bank），工作细胞库用于生产。细胞库通常保存在液氮中，需要维持整个产品的生命周期。在构建生产用细胞株的过程中，宿主细胞和表达载体至关重要。

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