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ATCC细胞的分类检测是怎么完成的?

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2021-09-10  浏览次数:85

   ATCC细胞说明书有关于细胞复苏和传代的详细步骤,除说明书外,还有另外一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具体批次信息,如每管细胞的数量,建议复苏使用的培养基用量,已知细胞的传代代次等重要信息。
  ATCC细胞的分类检测步骤如下:
  1.样本储存
  收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
  2.试剂盒成分
  人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪;植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。
  相关操作方法:
  1.取成年新西兰大白兔,耳缘静脉注射空气处死后,取下兔子的双腿,立即用75%乙醇浸泡。
  2.移入细胞房内,去除双腿表面的皮毛及肌肉,剪取关节段,移至超菌工作台内。
  3.PBS洗涤数次,用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。
  4.软骨组织块静置5min,弃去上层液体及悬浮组织,将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化15-20min。
  5.4℃静置5min;弃上清,PBS洗涤,去上清。加入0.2%胶原酶II,置入37℃的恒温摇床中,振荡消化2H。
  6.加入生长培养基终止消化,反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm离心8min,弃上清,用DMEM完全培养基重新悬浮细胞,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
  7.细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞完全展开后即可固定做原代鉴定。

 

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