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原载自：www.co-bioer.com[行情动态] 2021-09-10 浏览次数：799

　　ATCC细胞说明书有关于细胞复苏和传代的详细步骤，除说明书外，还有另外一份重要文件-COA（Certificate of Analysis）。COA中包含具体批次信息，如每管细胞的数量，建议复苏使用的培养基用量，已知细胞的传代代次等重要信息。

　　ATCC细胞的分类检测步骤如下：

　　1.样本储存

　　收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

　　2.试剂盒成分

　　人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪；植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

　　相关操作方法：

　　1.取成年新西兰大白兔，耳缘静脉注射空气处死后，取下兔子的双腿，立即用75%乙醇浸泡。

　　2.移入细胞房内，去除双腿表面的皮毛及肌肉，剪取关节段，移至超菌工作台内。

　　3.PBS洗涤数次，用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。

　　4.软骨组织块静置5min，弃去上层液体及悬浮组织，将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化15-20min。

　　5.4℃静置5min；弃上清，PBS洗涤，去上清。加入0.2%胶原酶II，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化2H。

　　6.加入生长培养基终止消化，反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液，1200rpm离心8min，弃上清，用DMEM*培养基重新悬浮细胞，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。

　　7.细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞*展开后即可固定做原代鉴定。