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细胞株的增殖检测技术探讨

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2021-10-15  浏览次数:760

   细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物,也就是说,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株;如果可连续传代,称为连续细胞株。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定的并连续传代的即可称为连续性株或系。
  细胞株应用MTT比色法,可检测其存活和生长状况。其检测原理为活细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源性无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联免疫检测仪在一定波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
  该方法现已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验、以及肿瘤放射敏感性测定等。
  相关项目如下:
  1.细胞接种:用户收到细胞后,用细胞计数板计数细胞,得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数,按MTT试剂盒要求在96孔板内接种相应浓度的细胞悬液;
  2.细胞培养:在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;
  3.药物处理并呈色:按不同浓度梯度加入药物作用细胞;
  4.溶解、比色:加入MTT检测试剂,按操作要求孵育相应时间,在酶标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。

 

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