ATCC细胞计数方式

　　（1）新玻璃器皿的清洗步骤：先用自来水或肥皂水刷洗干净，放入洗液中过夜或浸泡几天，取出用自来水冲洗8至10次。然后，用蒸馏水洗3次，用去离子水（或三蒸馏水）洗2－3次，烤干、包装、灭菌。

　　（2）橡皮制品的清洗步骤：一般选用白皮橡皮塞，使用前先用自来水洗涮干净，以后用2％NaOH煮20分钟，用自来水冲洗5－6次，再用1.3％HCl煮30分钟，用自来水冲洗5－6次，用蒸馏水洗3次，zui后用去离子水洗，干后包装灭菌。

　　ATCC细胞计数一般用血球计数板，按白血球计数法进行计数。

　　操作方法如下：

　　1.首先取待稀释的ATCC细胞悬液1ml加4ml生理盐水（或Hank液）作5倍稀释。

　　2.先将特制的盖玻片放在血球计数板上，使两侧均现带色牛顿环。用血色素吸管（或ATCC细胞管）取少量待测ATCC细胞悬液，沿盖玻片边缓缓滴入，让其自由渗入，待整个盖玻片下均充满ATCC细胞悬液为宜。注意不要使液体流到旁边的凹槽中。

　　3.在显微镜下，用10′10的倍数进行计数，所用计数板如图2所示。

　　4.计数的方法：计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的ATCC细胞数。计数时，只计数完整的ATCC细胞，若聚成一团的ATCC细胞则按一个ATCC细胞进行计数。在一个方格中，如果有ATCC细胞位于线上，一般计上线ATCC细胞不计下线ATCC细胞，计左线ATCC细胞不计右线ATCC细胞，计数误差不能超过±5％。

　　5.计数的换算：计完数后，需换算出每毫升悬液中的ATCC细胞数。由于计数板中的每体积即为0.0001cm2。故可按下式计算

　　原ATCC细胞悬液ATCC细胞数/ml＝n/4′10000′5（稀释倍数）

　　n＝四大格内的ATCC细胞总数

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