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离体培养ATCC细胞系

原载自:www.co-bioer.com[行情动态]  2016-06-27  浏览次数:1812

   离体培养ATCC细胞系一般要参考该种动物的体温设计培养时所用温度。通常哺乳动物的体温在37-38.5°C,禽类略高些,温度在39°C-40°C。因此,离体哺乳动物ATCC细胞系培养的温度zui适为37-38.5°C。在较低温度环境中,对ATCC细胞系影响不大,但细胞系对较高温度却比较敏感。
  ATCC细胞系生长、繁殖的zui适条件是它们在机体内所处的条件,但如将组织、细胞系从机体内取出,让其在离体条件下生存,那就必须模拟机体的环境。然而机体毕竟是太复杂了,所以在体外只能保证ATCC细胞系生长,繁殖所需要的zui基本因素,现简单介绍这些因素的作用。
  1.培养基(液):ATCC细胞系培养所用的培养基主要是人工合成的。通常其主要成分含有氨基酸、维生素、糖类、无机盐、生长因子和其他的辅助物质。当然不同的组织和ATCC细胞系对培养基成分的要求有所不同,因而进行培养时应区别对待,为其选择zui适条件的配方。配制时应注意以下几点:
  (1)水是ATCC细胞系生命活动的重要因素之一,细胞系培养用的各种液体都要用水配制。由于有毒物质和元素等即使含量很低也能引起细胞系培养的失败,所以ATCC细胞系中所用的水必须经过高度的纯化。通常使用的是三次蒸馏水或去离子水。
  水质的好坏可用电导仪检测其电阻值,即水中离子的导电状况,越低的水含离子越少,电阻值也越高。一般以25°C时的欧姆(W)/cm表示。ATCC细胞系培养用水的电阻值一般选用100万欧以上的去离子水为宜。
  (2)无机离子既是维护ATCC细胞系生命所需要的成分,而且对维持一定的渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度等方面都起着重要的作用。所以在配制ATCC细胞系培养液时,必须根据这几方面的需要,加入必需的一些无机盐类。就多数动物来说,所需的无机盐类有Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Cl-,碳酸盐,磷酸盐等。它们彼此之间常保持一定的比例。破坏了这种关系,就会使培养的ATCC细胞系受到损害。
  (3)血清是ATCC细胞系培养液中的重要成分之一。血清中含有丰富的营养物质,如蛋白质和核酸等,血清不仅为细胞系的生长提供所必需的营养,还具有促生长能力。血清对ATCC细胞系附着和生长均有明显的促进作用,并能中和有毒物质的毒性,使细胞系不受到损伤。用于细胞系培养的血清来源是多种的,如人血清、马血清、兔血清等。zui常用的是牛血清。一般讲动物愈年轻,其血清愈有利于细胞系生长,故成年牛血清不如犊牛的好。ATCC细胞系培养中所用血清的质量会直接影响到细胞系生长的状况。
  (4) pH值对细胞系生长有影响。来源不同的细胞系,由于它们处于有机体的不同部位或器官,其所处外环境的pH值也不相同,所以在培养ATCC细胞系时,应参考该ATCC细胞系在机体内所处外环境的pH值配置适宜pH培养基(液)。一般以中性为好,刚开始培养的哺乳动物的细胞系,pH在7.0左右较好,贴壁生长的细胞系在pH7.2-7.4生长,以不超过pH6.8-7.6为宜。高于或低于此限度时,往往会引起细胞系死亡。在ATCC细胞系培养过程中,必须注意培养液pH值改变与细胞系生长的关系,找出规律。在pH值变得不适于ATCC细胞系生长时,应及时更换新的营养液。

 

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