新药早期体外药物筛选是候选分子发现、靶点活性评估的关键环节，筛选模型的稳定性、数据重复性直接决定药物研发成功率。Cobioer 科佰生物深耕药靶细胞模型开发，搭建标准化体外药物筛选服务平台，可提供专业GPCR 药物筛选服务，同时输出细胞模型产品 + 筛选实验外包一体化解决方案。

一、前期项目评估与方案确认

在开展 GIPR 等 Gs 型 GPCR 药物筛选前，先完成需求对接，确定整套实验方案。

1. 客户需求收集：确认靶点（如人源 GIPR）、检测类型（激动剂筛选 / 拮抗剂验证）、化合物类型（多肽、小分子）、实验模式（高通量初筛、剂量‑效应复筛）、检测方法（报告基因荧光素酶实验 / HTRF‑cAMP 实验）。

2. 模型选型：针对 GIPR 激动剂活性检测选用GIPR CRE‑Luc HEK293（CBP71346）报告基因细胞株；双靶点项目可选用 GLP1R&GIPR Dual Reporter Cell（CBP71499）。该细胞稳定表达人 GIPR 受体与 CRE‑Luc 报告元件，支原体阴性，内部验证稳定传代 32 代，适合药物筛选与 QC 批次放行。

3. 方案输出确认：确定板型（96 孔报告基因实验 /384 孔 HTRF cAMP 实验）、化合物浓度梯度、复孔数量、阳性 / 阴性对照（阳性对照：GIP、Tirzepatide），确认实验周期与交付标准后启动项目。

二、细胞模型制备（筛选前置关键步骤）

分为两种合作模式：客户自行采购细胞；外包筛选由我方完成全部细胞操作。

1. 细胞复苏：冻存细胞 37℃水浴快速融化，加入预热培养基（DMEM+10% FBS+2 μg/ml 嘌呤霉素 + 200 μg/ml 潮霉素 B），1000 rpm 离心 5 min 去除 DMSO，重悬接种 T25 培养瓶，37℃、5% CO₂培养箱培养，24‑36 h 换液去除死细胞。

2. 细胞传代扩增：待细胞汇合度达 80% 左右，PBS 清洗，yimei消化，培养基终止消化，离心重悬，分瓶传代；筛选实验必须使用对数生长期的细胞，不使用超 32 代的细胞做功能实验。

3. 细胞质控：观察细胞贴壁形态，确认无支原体污染；流式细胞术验证 GIPR 受体表达水平，保证受体表达正常，确保后续信号窗口 S/B 满足筛选要求。

三、待测化合物前处理

1. 化合物母液配制：多肽 / 小分子用 DMSO 配制成高浓度母液，避免反复冻融。

2. 梯度稀释：

   • 报告基因实验：DMSO 做 4 倍梯度稀释，设置 12 个浓度梯度，再用培养基稀释，控制 DMSO 终浓度，设置零浓度空白对照。

   • HTRF‑cAMP 实验：按照 5 倍或 4 倍做梯度稀释，后续用刺激缓冲液二次稀释。

3. 设置对照组：阳性对照 GIP/Tirzepatide、溶剂对照、空白细胞对照，用于模型有效性判定。

四、两种主流体外筛选实验流程

方案 A：Reporter Assay 荧光素酶报告基因筛选（96 孔板，适合激动剂剂量响应、高通量筛选）

1. 铺板：消化对数期细胞，调整细胞密度(3×10^5) cells/mL，100 μL / 孔接种 PDL 包被 96 孔白板，37℃培养箱过夜贴壁。

2. 给药孵育：加入梯度稀释的待测化合物，37℃孵育 5 h，受体被激动后激活 Gs‑cAMP‑CRE 通路，启动荧光素酶报告基因表达。

3. 发光检测：每孔加入 Ultra Luciferase Detection Kit 发光试剂，室温放置 3‑5 min，多功能酶标仪读取 RLU 发光值。

4. 信号判断：信号强弱代表受体激活程度，得到不同浓度对应的发光读值。

方案 B：HTRF cAMP Assay（384 孔板，直接检测第二信使 cAMP，灵敏度高）

1. 铺板：细胞消化洗涤后，用刺激缓冲液重悬，调整细胞密度 (1×10^6) cells/mL；每孔加入 5 μL 细胞悬液（每孔 5000 个细胞）至 384 孔检测板。

2. 加药孵育：加入梯度稀释的待测激动剂，37℃孵育 30 min；受体激活 Gs 蛋白，胞内 cAMP 含量升高。

3. 裂解与检测：依次加入 cAMP‑d2、Anti‑cAMP‑Cryptate 试剂，室温孵育 1 h；酶标仪读取 330 nm 激发下 665 nm/620 nm 荧光比值。

4. 信号判读：HTRF 比值随胞内 cAMP 升高而下降，以此反映 GIPR 受体激活水平。

五、数据分析与药效参数计算

1. 剔除异常孔，计算复孔平均值，扣除本底信号；评估筛选窗口 S/B、Z‑factor，判定本次实验数据是否有效。

2. 使用 GraphPad Prism 软件，以化合物 Log 浓度为 X 轴，检测信号（RLU / HTRF 比值）为 Y 轴，拟合剂量‑效应响应曲线。

3. 输出核心药效参数：EC₅₀、最大激活效应 Emax、S/B 信号窗口。

参考本细胞实测数据：GIP 在 GIPR CRE‑Luc HEK293 细胞 EC50 可达 36.2 pM，S/B=109，模型灵敏度高。

六、结果整理与结题交付

1. 交付内容：实验材料方法说明、原始读值数据表、拟合剂量‑响应曲线图、阳性对照验证图、EC50 汇总表。

2. 结果解读：区分 Hit 活性化合物、弱活性化合物、无活性化合物。

3. 可选后续服务：

• Hit 化合物重复验证；

• 靶点选择性筛选（交叉检测 GLP‑1R 等同源受体）；

• 拮抗剂、反向激动剂评价；

• 双 / 三靶点细胞株筛选（GLP1R&GIPR、GLP1R&GCGR&GIPR）；

• 定制细胞株构建服务。

七、延伸：GLP1R&GIPR 双靶点药物筛选差异点

双靶点细胞株 CBP71499 同时表达 GLP1R 与 GIPR 两个受体，同样基于 Gs‑CRE‑Luc 报告通路；实验操作步骤与上述流程一致。实验完成后可同时反映化合物对两个受体的整体激活能力，适合替尔泊肽类双重激动剂药物的体外药效评价。

除GLP1R GIPR Dual Reporter Cell 报告基因细胞株外，Cobioer 科佰拥有覆盖 GPCR、激酶、肿瘤靶点的数百种重组细胞株产品库，配套完整GPCR 药物筛选服务及全链条药物筛选技术服务。我们的药物筛选业务包含分子水平体外活性检测、细胞水平功能筛选、高通量 HTS 筛选、化合物剂量响应曲线测定、靶点结合实验、稳定细胞株定制构建、基因编辑细胞模型开发等。所有实验遵循标准化 SOP，可提供原始实验数据、拟合药效曲线、完整结题报告，支持项目分阶段交付。

面向药企、CRO、高校及科研院所，我们支持两种合作模式：客户直接采购各类药靶报告基因细胞株自主开展筛选实验；也可将全部或部分筛选实验外包给我方，由专业团队完成化合物活性评价。全套模型均经过严格的细胞鉴定、稳定性测试与功能验证，减少实验摸索成本，缩短 hit 到 lead 研发周期。

我们的细胞筛选模型广泛应用于代谢疾病、肿瘤、自身免疫等创新药物研发，可满足小分子、多肽类候选药物的早期体外评估需求。团队具备多年 GPCR、激酶靶点疗筛选项目经验，可根据客户项目需求，定制检测方案、灵活调整 96/384 孔高通量筛选体系，为创新药早期发现提供稳定可靠的体外筛选工具与技术支撑。